ELISA法检测肺炎支原体

    肺炎支原体可引起支原体肺炎，曾被称为“非典型肺炎”。支原体肺炎通常起病缓慢，病情严重，体征轻微，肺炎常为间质性。此外，肺炎支原体与人脑组织有共同抗原，故亦可引起中枢神经系统症状。临床上一般通过检查肺炎支原体抗体IgG、IgM诊断支原体肺炎。

    （一）肺炎支原体抗体IgG检测

    [检测方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔反应板上包被纯化的肺炎支原体抗原，加入待测标本孵育后，使之发生反应，然后去除未结合的抗体，加人结合有过氧化物酶的抗人IgG抗体，使之与已结合的抗体反应，结合的过氧化物酶与发色底物发生反应产生颜色。zui后，终止底物反应，在酶标仪上读出吸光度值。

    [标本准备]  取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验，分离血清后将其保存于一20℃。检测时，使样本恢复至室温。

    [试剂]

    1．预包被微孔板

    2．阳性对照

    3．弱阳性对照

    4．阴性对照   

    5．标本稀释液

    6．浓缩酶联物

    7．底物A、B

    8．终止液

    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪

    [检测步骤]

    1．配制洗涤液  1瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中，长期可存于2～8℃环境中。

    2．配制酶联物  按1：101倍稀释，取10gl浓缩酶联物，加酶联物稀释液1 000ul（根据检测标本数量确定稀释量），未用完的丢弃。

    3．待试剂盒平衡至室温后，待测标本用标本稀释液按1：201稀释，即取1P1血清与200gl标本稀释液混合。

    4．各加100gl阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100~I标本稀释液，盖好反应板，37℃环境中孵育30min。

    5．甩尽板中液体，每孔用200—300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。

    6．每孔加酶联物100ul，盖好反应板，37℃环境中30rain。

7．甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。

8．加底物A、B各1滴或各50gl，混匀，37℃环境中15min。

    9．取出，加终止液1滴，用酶标仪450nm测其OD值，若肉眼观察则不加终止液。

    [结果判断]

    1．阴性对照平均OD值须小于0．20。

    2．弱阳性对照平均OD值须在0．20～0.65

    3．弱阳性对照和阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时本试验结果可信，否则重复试验。

    4．若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深，则判为阳性，反之为阴性。但若在弱阳性对照值上下10％范围内再测1次，如确实高于弱阳性对照时可判为阳性。

    [注意事项]  本试验结果须结合临床表现、病史作出诊断后，方可采取适当临床处理。