温度的变化会对色谱分析方法的重现性和的寿命产生重大影响。但为什么会这样？恒谱生在以下的内容将会为您介绍。

一、再现性

随着温度的变化，液相色谱柱内固定相和流动相之间的热力学会受到直接影响。在不同温度下运行方法可能会影响分析物容量因子 (k) 或分析物在色谱柱上的保留时间。

在升高的温度下，流动相和分析物的动能都会增加。分析物动能的增加将导致它们更强烈地移动和振动，并将破坏分子间结合，即分析物和固定相之间的分离和保留机制。很多时候，这会导致所有分析物更快地从中流出，从而缩短保留时间。通常，这在温度跳跃较大时明显。

仅几摄氏度的温度变化只会影响色谱图中的少数特定分析物。小的温差足以促进分析物与固定相或流动相的有利相互作用。在样品色谱图中可以看到这种特定的相互作用，因为与其他分析物相比，只有一种分析物的保留时间发生了变化，否则它们会保持其保留时间。由于很难预测哪些分析物（如果有）会因温度波动小而表现出保留变化，因此做法是通过打开色谱柱加热器并将盖子连接到加热器上来保持一致的温度。

热力学通过影响作为温度函数的流动相粘度继续影响色谱。许多色谱工作者已经抓住并利用这种关系为自己谋取利益。一般来说，随着流动相粘度的降低，色谱柱上的反压会直接降低，从而使方法能够以更高的流速流动，而不会达到色谱柱或仪器的压力。

乙腈优于甲醇的原因之一是乙腈的粘度较低（0.37 cPoise 与甲醇的 0.60 cPoise 相比）。在反相 LC 中使用甲醇作为有机溶剂时，方法的温度往往为 40 – 60 °C，以通过降低粘度来帮助降低背压。

大型生物分析物的展开可能会发生变化，从而导致它们的 3D 结构发生变化。由于许多因素，可能会发生变性或展开，其中之一是温度。适合分离大多数的疏水化合物，如果生物样品部分展开可能会暴露之前可能已经埋在折叠结构中的疏水或亲水基团，这可能会影响分析物的整体保留时间。

二、液相分析柱使用寿命

温度也会影响色谱柱的整体寿命。色谱柱的固定相是驱动其温度规格的因素。色谱柱的温度稳定性可能因使用的溶剂和缓冲液而异。对于大多数反相色谱柱而言，60°C 至 90°C 是常见的温度范围。

在酸性条件下升高的温度为与二氧化硅键合的配体的水解提供了有利的热力学条件。由于失去了为分析物提供保留相互作用的固定相，水解被观察为保留时间提前移动。峰之间的分离度损失将比保留时间的整体偏移发生得更快。

与具有相同固定相的新色谱柱相比，通常会看到基线分离度下降或峰合并在一起。做法是在打开柱箱且没有溶剂流过系统时不要将色谱柱留在柱箱中。大多数流动相中都含有一些有机物，当色谱柱储存不当时，它们会更快地蒸发掉。