Foodjx导读:通常情况下,制备型超高速(preparativesuper-speed)实验室
离心机高速离心的原理有差速离心(differentialcentrifugation)和密度梯度离心(densitygradientcentrifugation)两种。其中,差速离心法是相对更为常用的方法。
Usuallypreparativesuperspeedlaboratorycentrifuge'sworkingprincipleisknownaseitherdifferentialcentrifugationordensitygradientcentrifugation,amongwhich,thedifferentialcentrifugationismorecommonlyused.
实验室
高速离心机机差速离心是采用逐渐增大离心力的方法来达到使样品溶液中的各种成分沉降分离的目的。具体操作步骤是:首先在离心管中盛满同质均一的样品溶液,设定一定速度一定时间离心后溶液会分成上清液和沉淀物两部分;去掉*次离心的沉淀物,增大离心力继续离心上清液以沉积所需的离子。值得注意的是,两次离心的时间都必须选择得当才能达到所需的分离纯度。
Thedifferentialcentrifugationmethodusedinlabhighspeedcentrifugeworksinthisway,separatingdifferenementsofthesamplesolutionviamulti-centrifugepoweredgraduallydifferently.Followingisthedetailoperation,firstlyfillthecentrifugetubewithuniformsolutionandcentrifugeitforacertaintimetodividewhichintoliquidsupernatantandprecipitate;nextgetridoftheprecipitateandcentrifugetheliquidsupernatantwithanincreasedpowersoastogetwhateveryouneed.Whatworthmentioningisthatthetwocentrifugationperiodmustbecarefullysettogettheneededcentrifugationfineness.
相对而言,差速离心的操作更为简单,而密度梯度离心的分离纯度更高。离心机密度梯度离心法能达到很好的分辨率,它能使溶液中所有的组份分离。密度梯度分离通常有速率区带法(ratezonal)和等密度离心法(isopycnic)两种。前者的依据是溶液中不同粒子的尺寸大小和沉积速度不一,而后者的依据是不同粒子的密度不同。
Comparativelyspeaking,thedifferentialcentrifugationoperatesmucheasier,yetthedensitygradientcentrifugationmethodcomesupwithmuchhigherfineness.Thatistosay,thedensitygradientcentrifugationcanseparateallelementfromeachuptideandclean.Itusuallyworksintwoways,ratezonalandisopycnic.Ratezonalworksbecausethatdifferenementsinthesolutionhasdifferentsizesandthusdepositionratewhiletheisopycnicworksbecauseofthedifferentdensityofdifferenementsinthesolution.
采用密度梯度分析法离心时,梯度形状至关重要。线性梯度(lineargradient)是zui常用的。它可以用来分离蛋白质、酶和植物病毒等,等速型梯度(constantspeedgradient)适用于分离脂蛋白;分离整细胞和亚细胞采用的则是阶梯型梯度(stage-wisegradient)。
Thegradientshapeplaysakeyrolewhenusingdensitygradientcentrifugation.Thelineargradientisthemostcommonlyusedshape.Itcanbeusedtocentrifugeprotein,enzymeandplantvirus,theconstantspeedgradientshapecanbeusedtocentrifugelipoproteinandthestage-wisegradientcanbeusedtocentrifugewholecellandsubcellular.
采用密度梯度分析法离心后,区带样品的回收方法也是多样可选的。常用的有以下四种:穿刺法、虹吸法、加压法和切割法。
Aftercentrifugingdonebydensitygradientcentrifugation,andzonesamplecanbecollectedindifferentmethods,puncturing,siphonage,pressuringandcutting.
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