1 免疫学检测

　　免疫学检测依据免疫学理论和技术，基于抗原抗体反应，从而设计抗原、抗体、免疫细胞、细胞因子的检测分析方法。微生物表面具有其特异的抗原，并能激发机体产生相应的特异性抗体；通过抗体结合表面抗原位点反应前后的信号变化，检测目标物；其中，借助标记物进行间接检测的研究，得到了快速的发展和检测效果的改善。近年来，发展较快的免疫检测方法有如下四类。

　　1.1 酶联免疫吸附法

　　酶联免疫吸附分析法的关键点是酶标记，利用标记酶对底物的催化性能，将信号进行放大，从而达到灵敏检测致病菌的目的。在检测时，常借助抗原抗体间的特异性，通过三明治夹心结构将酶引入体系，此时载体上的酶量与待测菌的量呈现一定的比例。加入酶的催化底物，酶与底物反应后所形成产物的量与待测菌的量呈现一定的关系，因此只要检测出产物的量就可以定性或定量检测致病菌。由于酶有较高的催化效率，间接放大了免疫检测信号，该类检测方法具有较高的灵敏度。

　　1.2 荧光免疫检测法

　　1941年，Coons等将荧光素用作标记构建检测体系。经过发展，该类方法的标记物拓展到其它荧光活性分子，标记对象主要为抗原、抗体，在免疫反应结合后，通过荧光成像、荧光光度计等检测标记物的荧光信号，间接表示目标物含量。该类方法在可视化检测领域具有很好的应用前景。

　　1.3 免疫胶体金标记分析法

　　免疫胶体金标记技术主要包括胶体金光镜染色法、斑点金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法。它是一种将胶体金标记技术、层析分析技术以及免疫检测相结合的快速检测技术。c# 图像识别其原理是依靠抗原与抗体的特异性结合，zui终使胶体金变色，从而达到定性或定量检测目的。在检测时，将抗原滴至加样孔膜上与金标抗体结合，在吸水材料的牵引下沿试条展开，到达检测线时由于特异性结合形成两个抗体结合一个抗原的复合物，由于金颗粒的沉淀，因此检测线呈红色。未结合抗原的抗体行至对照线，与上边的抗体结合，使得对照的线呈现红色，出现两条红线。若不含有目标致病菌则不发生结合，检测线不变红色，zui终只出现一条红线。

　　1.4 免疫磁珠技术

　　免疫磁珠分离技术将磁性分离与免疫反应相结合，从而构建免疫学检测技术；首先在磁珠上包被抗体，再与特定抗原发生特异性结合，将目标菌进行识别分离，zui后磁力富集。该类方法特异性强、灵敏度高、反应时间短。如果将免疫磁珠分离技术与快速检测技术相结合，可以将致病菌检测时间由传统的几天缩短到几小时，因此，在食源性致病菌检测中，免疫磁珠技术具有广阔的发展空间。

　　2 分子生物学检测技术

　　核酸生物分子作为生命体的基本单元，负责遗传信息的编码、传输及表达，作用非常重要。它由核苷酸组成，根据化学组成不同分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。目前已有的核酸扩增技术分为两大类：靶核酸的直接扩增与信号放大扩增。靶核酸直接扩增包括聚合酶链式反应、链替代扩增、连接酶链式反应和核酸依赖扩增、转录介导扩增和滚动环扩增；另一类是信号放大扩增：包括支链DNA、侵染探针和滚动环扩增等。分子生物学方法在致病菌检测领域，得到了很好的应用[7]。

　　2.1 聚合酶链式反应（PCR）

　　1985年，Mullis等人发明了PCR技术，相对而言，PCR技术具有特异性高、灵敏度好、操作简单、重复性好的优点。PCR是一种DNA体外复制技术，通过复制放大，扩增目标互补DNA片段，以微量的DNA为起点，获得大量的复制DNA。PCR的基本原理和DNA复制过程相似，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。一般分为三个阶段：加热模板DNA发生变性；冷却使模板DNA与引物互补序列配对结合；在适度的温度下进行引物的延伸。重复这三个过程能获得更多半保留复制链，从而能在短时间内将目的基因扩增放大几百万倍，PCR技术主要应用于单管PCR产物的实时荧光检测。

　　2.2 连接酶链式反应（LCR）

　　1987年，Backman研究发明了LCR方法技术。1991年，Backman和Barany分别用耐热DNA连接酶延伸了LCR试验，为LCR的实用发展奠定了基础。LCR技术依靠碱基的互补配对原理开展检测，在DNA连接酶的作用下，通过连接与模板DNA互补的两个相邻寡核苷酸链，进行DNA片段的快速扩增，从而复制出大量靶基因。

　　2.3 环介导等温扩增技术（LAMP）

　　2000年，Notomi等提出LAMP技术，LAMP技术依靠能对靶序列上的6个独立区域特异性识别的4种引物，及具有链置换活性的DNA聚合酶，通过循环链置换反应，达到靶序列的扩增。反应包括两个阶段，循环扩增始发物的形成与循环延伸。首先，由外部引物扩增出内部引物所需的模板，接着内部引物对靶基因片段进行引导合成。如此循环反应zui终形成带有类似花椰菜的茎-环结构，该法可在短时间内实现109—1010倍的扩增。Malcolm等结合多重PCR技术和LAMP方法，构建了副溶血性弧菌的定量检测体系[9]。Lee结合LAMP和免疫层析技术，以未前处理的全血和牛奶为检测对象，实现了*和大肠杆菌O157：H7的检测[10]。LAMP方法是一种快速简便、省时省力、特异性好、灵敏的致病菌检测技术。