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食品酶联免疫法与其他方法检测

来源:   2012年05月04日 09:15   1583
  1回收率及精密度数据⑴在鸡肉样品中添加3个浓度水平的*标准,每一浓度测定12次。详见表1⑵在猪肉样品中添加3个浓度水平的*标准,每一浓度测定12次。详见表2⑶在虾仁样品中添加3个浓度水平的*标准,每一浓度测定12次,变异系数为17.5%~19.2%⑷在肠衣样品中添加3个浓度水平的*标准,每一浓度测定12次,变异系数为10.1%~19.2%表1鸡肉测定低限、回收率及精密度试验数据表2猪肉测定低限、回收率及精密度试验数据2.3标准曲线的重复性两个月内用6盒不同批号的r-biopharm试剂盒中的*标准液重复测定15次,每次每个标准液做2个复孔,批间变异系数3.7%~8.1%,平均为5.9%。
  
  2本方法检测的阳性产品与确证方法检测结果的比较*检测阳产品中,选择部分进口产品和供应香港的产品进行*气相质谱法(GCMS)进行比较,实验中发现150ng/kg以上*含量的阳性样品,两种方法检测的数值较接近。
  
  酶联免疫法与其他方法检测*的比较目前公布的*检测技术方法及相关的测定低限分别为:杯碟法、放射免疫法、酶联免疫法、气相色谱法和液相色谱法五种,阳性结果由阴离子化学电离法和质谱法(MS)确认。杯碟法和液相色谱法己不能满足zui高要求,气相色谱法和放射免疫法必须配备昂贵的仪器设备,样吕前处理复杂工作量大,检验周期长,很难在基层单位和大规模残留监控普查中推广应用,且放射免疫法还需配备放射源,有一定的危险性,国处已逐步用其他方法替代,而酶联免疫法ELISA国内外近20年来技术上的不断改良和发展,已经在病毒、细菌、寄生虫等医学检验方面得到了广泛应用,同时伴随着单克隆技术的应用和抗体提纯,酶制备等相关技术的提高,其特异性和灵敏度都大大提高,现在普通的基层实验室就能开展这一工作,并为多国政府部门认可。酶联免疫法检测农兽药和抗生素残留的商品化试剂盒种类也较多,便于检测单位选择,AOAC已将这一技术推荐为快速筛选方法。美国食品安全局和欧共体每年几万个样品的残留监控项目,大多是先用酶联免疫试剂盒进行样品筛选检验,阳性结果再用化学方法进行确认,如果没有筛选检验这一步骤,残留监控检验将耗费大量的人力、物力和财力,并且很难在短时间内完成普查工作。目前检测*酶联的试剂盒约有十几种,德国r-biopharm生产的的氯霉酶联免疫定量检测试剂盒为AOAC推荐的快速方法,一个试剂盒zui多一次可同时做42份样品,可检测牛奶、肉类、水产品、蛋类、内脏、蜂蜜、尿液、血液等多种样品,样品前处理方便5~6h就可出检测结果(其他现有方法所*的),检测设备投资少,无放射性污染。本方法可作为*筛选检验,阳性结果还须用其他方法进行确认。
  
  筛选检验和确证方法协同使用衔接点的讨论现在欧盟国家已规定所有检测*方法的检测低限必须低于200ng/kg。酶联免疫筛选方法*的检测低限为100PPT,但受样品提取效率和背景干扰的影响,一般定量起始点为100~150ng/kg,GCMS等确证方法的检测低限为100~200ng/kg,但笔者却建议只对酶联免疫法检测*150ng/kg以上的阳性样品进行逐件GCMS确认,100~150ng/kg可判为可疑样品,累计到一定数量后再随机抽取进行确证度验。因为从大量*检测数据看,如果以100ng/kg作为阴性和阳性的分界值,〈100ng/kg的阴性样品中只有小部分样品(约占15%)*筛选结果〈50ng/kg无数值可读出,大部分的检测值在50~80ng/kg之间(约占85%),可能有*存在,也可能是背景干扰,但无法确证。即使是〉100ng/kg一点点的阳性样品,也可能会是抽样和操作误差或背景干扰所引起的,因此100ng/kg附近筛选方法和确证方法的衔接比较困难。从本方法测定低限实验数据中得到启示,将Ⅹ+2S值附近定为衔接点(Ⅹ-检测低限平均值为99;S-检测低限标准差为16;X+2S=131ng/kg),此浓度与100ng/kg吸光度值已有明显差异,并超出了这一水平误差允许的范围(120%),各种干扰因素对测定的影响已逐步减小,又能结合酶联免疫法中150ng/kg的*标准液横向比较,参考确证方法的灵敏度(100~200ng/kg),衔接点定为150ng/kg是比较合理的,达到两种方法可靠性和灵敏度的兼顾,又符合要求。
  
  3总结本法采用了技术成熟、应用广泛、适用性强的酶联免疫技术,选用了目前世界水平的r-biopharm公司试剂盒,经改进和试验后对多种产品进行了*检测分析,并制定了本方法。一系列的试验和检测数据表明:本方法测定低限(100ng/kg)能达到目前上*残留测定低限的要求,并有继续提高检测灵敏度的潜力,同时具有快速(5~6h出结果)、特异性高、设备仪器投资少检测成本低、多种类样品前处理方法―致且简便、阳性结果与其他确证方法相一致等优点。
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